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離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶具體操作說明
更新時間:2012-08-24   點擊次數:2004次

離心機,想必很多人一聽到這個詞就知道這不就是實驗室常用設備其中之一嘛。是的,說起離心機,大家都會聯想到很多。臺式離心機可以應用于乳酸脫氫酶及輔酶的提取。乳酸脫氫酶,是一種不需氧脫氫酶,以輔酶I(NAD﹢)為輔酶,催化乳酸與丙酮酸的可逆的氧化還原反應。肌肉中含有大量的乳酸脫氫酶,在乳酸含量較高及氧氣充足情況下,催化乳酸生成丙酮酸,體外實驗中,為觀察方便,在隔絕空氣后以甲烯藍作為受氫體,井用固定反應中生成的丙酮酸,而使乳酸全部轉化為丙酮酸。今天我們對如何通過臺式離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶I進行介紹。

通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料、試劑及設備有:(1)動物后腿肌肉(2)9g/LNaCl溶液(3)活性炭(4)10g/L乳酸鋰溶液(5)5g/LKCN溶液;(6)乳缽(7)臺式離心機等

具體操作方法:

1.輔酶I(NAD﹢)的制備:取動物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分鐘(抑制酶的活力,防止將輔酶I破壞),取出冷卻、剪碎,加入少許9g/LNaCl溶液及細沙用乳缽研磨成糊狀,再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,利用臺式離心機進行離心沉淀,收集上清液,儲冰箱備用。

2.乳酸脫氫酶酶蛋白的提取:取動物后腿肌肉2g置乳缽中,加入少許9g/LNaCl溶液及細砂,仔細研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,用雙層紗布過濾,濾液加活性炭0.5g振搖數分鐘后放置半小時,并時常搖動,然后通過臺式離心機離心分離,取上清液備用。

看了以上的操作方法,你還可以自己試驗一下,或者上海旦鼎貿易有限公司。:  我們將專業為您選購適合實驗的離心機。

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